一間負壓手術室通常包括一個通風系統，以便空氣從走廊或者任意相鄰區域流進負壓手術室，同時確保污染的空氣無法從負壓手術室逸出，流入醫院和衛生機構的其它區域。

自然條件下，空氣從高壓帶向低壓帶流動。如果手術室處于負壓狀態，外面的空氣則會不斷從門下面流進房間，同時防止房間內滋生的氣態污染微粒逸出，進入外面的走廊。舉一個常見的負壓室例子，一間帶排氣扇的浴室就是一間負壓室。負壓條件形成后，關閉浴室門，風扇就會阻止不好聞的味道和濕氣逸出浴室。
要產生負壓狀態，可通過平衡房間的通風系統，讓自動排放的空氣多于自動提供的空氣即可實現。這樣就造成通風不平衡，房間通風系統不斷從房間外面吸進空氣補充。在一間經過精心設計的負壓室里，空氣完全通過門下面的一個縫隙（一般大約半英寸高）流入。除該縫隙外，這間負壓室應該盡可能密封，以防止空氣通過各種其它裂縫和縫隙進入，例如窗戶四周的各種縫隙，墻上照明設備以及插座等。即使房間已經實現了負壓條件，這些地方漏進的空氣仍可能抵消或者消除房間的負壓狀態。
實現和維持房間負壓以便空氣流進房間所需的最小壓力差非常小（水位表的0.001英寸）。實際實現的負壓值取決于通風系統空氣消耗量與供應量的差額以及房間的結構和大小，包括空氣流動路徑和流動開口。如果房間密封情況良好，則很容易實現高于0.001英寸水位表的負壓值。但如果房間密封情況不佳，正如很多衛生機構的實際情況（特別是比較舊的醫療機構），要實現較大的負壓值可能需要排放量/供應量差值大于通風系統容量。
要在一間通風系統正常運行的條件下實現負壓環境，首先調節房間的空氣流動供應量與排放量，實現排放量比供應量高10%或者高50立方英尺/分鐘（取決于較高值）即可。大多數情況下，這種標準就能夠實現至少0.001英寸水位表的負壓值。如果無法實現0.001英寸水位表的負壓值，也不能通過增加流量差額（在通風系統允許范圍內）實現，則應仔細檢查該房間是否存在縫隙（例如門縫、窗縫、水管裝置和各種嵌入墻壁的裝置等），然后采取補救措施，密封這些裂縫。
房間內的負壓值可通過改變通風系統運行或者打開和關閉房間的門、走廊門或者窗戶而改變。如果已經建立起一種運行結構，應確保妥善關閉負壓室以及其它區域（例如影響空氣壓力的走廊門）的所有門窗，人員需要進入或離開房間或區域的情況除外。
煙霧試驗
煙霧試驗是一種很簡單的程序，用于確定房間是否已處于負壓狀態。將一節火管置于負壓室門下方，與門保持約2英寸的距離。輕輕擠壓火管球莖，讓火管產生少量煙氣。手持火管，與門保持平行，煙氣從管道中慢慢排出，確保煙霧排出速度低于空氣速度。如果房間已處于負壓條件，煙霧則會從門下方流入房間。如果房間處于非負壓條件，煙霧則會吹向門外或者保持靜止不動。#p#分頁標題#e#

該試驗必須在門保持關閉的情況下進行，并且，房間的所有窗戶也必須緊閉。如果房間的空氣凈化器已在運行（包括通風柜或者生物安全柜），必須保持運行。如果房間有接待室，則應測試從走廊到接待室以及接待室到房間的壓力差。

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